随着对参与表型可塑性的RNA异构体的困惑增加，异常的CpG甲基化介导的选择性剪接中断越来越被认为是肿瘤内异质性(ITH)的驱动因素。蛋白酶3(PRSS3)具有4种亚型，即PRSS3-V1到V4，是一种不可或缺的胰蛋白酶，对肺癌的发展有不同的影响。在肺癌中，作者发现PRSS3亚型在肺癌中差异表达，PRSS3-V1和V2是促癌的，而PRSS3-V3是抑癌的。

2023年5月，首都医科大学附属北京胸科医院肿瘤研究中心黄家强教授团队在Acta Pharma Sin B上发表了题为 “UHRF1/DNMT1eMZF1 axis-modulated intragenic site-specific CpGI methylation confers divergent expression and opposing functions of PRSS3 isoforms in lung cancer” 的研究论文。

PRSS3基因内部有一个CpG岛，它是一段富含CpG（胞嘧啶和鸟嘌呤）的DNA序列，它的甲基化状态可以影响PRSS3基因的转录。UHRF1和DNMT1两种蛋白质可以通过与MZF1蛋白质竞争，导致PRSS3的CpG岛甲基化增加，从而抑制PRSS3-V3的表达。大蒜衍生物DATS可以与5-aza-2′-deoxycytidine协同作用，去除PRSS3 CpG岛上特定位点的甲基化，恢复MZF1对PRSS3-V3的激活作用，从而抑制肺腺癌细胞的生长。

UHRF1/DNMT1–MZF1轴调控的PRSS3 CpG岛位点特异性甲基化可以造成PRSS3亚型表达的差异，导致肿瘤内部功能异质性，并且这一机制可能有助于肺癌的早期诊断和靶向治疗。

实验部分

本文使用TissueGnostics公司TissueFAXS Spectra全景多光谱组织扫描定量分析系统肺癌组织芯片样本（TMA）进行多色荧光图像采集，并且通过StrataQuest定量分析软件对中PRSS3亚型蛋白水平的定量分析（肿瘤组，正常组）。

作者使用多重免疫组化技术，用不同颜色的荧光标记PRSS3-V1到V4四种亚型（PRSS3-V1(绿色)、PRSS3-V2(橙色)、PRSS3-V3(红色)和PRSS3-V4(紫色)），以及CK蛋白（黄色）。定量分析肿瘤组和正常组(顶部)或CK阴性(CK-)和CK阳性(CK+)的组织阵列样本(底部)中PRSS3亚型的蛋白水平。

扩展阅读

在这篇文章中，作者提到了PRSS3作为一个潜在的药物靶点，但由于其在恶性肿瘤中表现出矛盾的影响，研究一直没有进展。此外，尽管通过转录水平的测序发现了分子表达的差异，但在蛋白水平上缺乏明确的表征。这主要是因为对于这类新兴的研究靶点，缺乏相应的蛋白抗体和可靠的评价指标。

为了解决这个问题，本文作者使用了商用的兔多克隆抗体，并结合TissueGnostics公司的Tissue Cytometry技术。首先，在一个包含7个通道染色的TMA样本上，对180个点进行成像。然后，利用精确的单细胞形态学定量方法，计算目标通道中单个细胞标记蛋白的表达量，并通过筛选阳性细胞来定量、定性和定位地解决问题。通过这种方法，作者解决了样本非特异性染色较强的问题，并排除了背景信号的影响。

这种方法为研究PRSS3及类似研究靶点的蛋白表达提供了一种解决方案，通过充分利用TissueGnostics的技术和合适的抗体，能够实现对细胞蛋白表达的准确评估和定量分析。这对于进一步研究和评估这些靶点的转化潜力具有重要意义。