二硫键是蛋白质中的一个重要结构单元，它是由两个半胱氨酸氨基酸残基中的硫原子在氧化环境下形成的，对于生物活性和功能起着决定性作用。二硫键广泛存在于细胞表面受体、抗体、生长因子、激素、酶等蛋白质中，并且容易被还原或发生错误配对，导致原始多肽或蛋白质的结构和生物学活性受到影响。二硫键定位分析通过确定蛋白质结构中二硫键位置和连接方式可以深入了解蛋白质的结构和功能。在生物药物的制备和研发过程中，错误的二硫键配对可能会导致药物失效，甚至可能有潜在的安全风险，因此，对二硫键进行准确的检测和控制是生物制品表征中必不可少的。

图1 二硫键定位分析原理

液相色谱质谱联用（LC-MS）技术的发展极大提高了检测的灵敏度和准确性，推动了二硫键分析的发展，也在二硫键定位分析中发挥着不可替代的作用。百泰派克生物科技BTP通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证。公司根据二硫键分析原理，结合高效液相色谱仪与高分辨率质谱仪建立了二硫键分析平台，为您提供精准的二硫键定位分析服务，无论链内/链间二硫键、一对/多对二硫键、交叉重叠抑或是错配的二硫键，BTP都可进行高效准确的鉴定。欢迎免费咨询，了解更多详情！

实验仪器

高效液相色谱仪：Easy-nLC 1200 （Thermo Fisher Scientific）

高分辨质谱仪：Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer（Thermo Fisher Scientific）

案例示意

液相色谱质谱联用法定位二硫键，不进行还原处理，而是直接进行烷基化，这个步骤将游离的巯基封闭。随后，进行酶切操作，将蛋白质分子切割成小片段。在这个过程中，存在二硫键的半胱氨酸之间形成了特定的连接，导致分子量发生变化。接下来，通过质谱仪采集数据，并使用相应的分析软件进行数据库匹配，从而得到二硫键的信息。

表1 二硫键分析

Site：形成二硫键的半胱氨酸在蛋白中的位置；Enzyme：酶解蛋白所用的酶；Peptide：肽段序列；PeptideMass：肽段分子量；MassError(ppm)：肽段的质量偏差

图2 肽段二级图

常见问题

问题1：质谱法鉴定二硫键的优势是什么？

回答：质谱法在鉴定二硫键方面具有多个优势。首先，它不仅可以确定二硫键的存在与数量，还能确定二硫键的具体位置和相对含量，提供了更详细的信息。其次，质谱法具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以准确地检测和定量二硫键，即使在低浓度下也能获得可靠的结果。此外，质谱法所需的样品消耗量相对较少，对于宝贵或有限的样品而言具有重要意义。因此，质谱法在二硫键分析中被广泛应用，为研究蛋白质结构和功能提供了有力的支持。

问题2：为什么要进行烷基化？

回答：进行烷基化是为了封闭游离巯基，防止实验过程中二硫键发生错配。在质谱分析中，样品的制备过程需要进行特殊处理，其中包括烷基化步骤。烷基化是通过将烷基化试剂与巯基反应，使巯基被烷基取代，形成烷基硫醇。这样可以有效地阻止巯基之间的反应，避免在实验过程中形成不正常的二硫键连接或错配。通过烷基化处理，可以确保在质谱分析中得到准确而可靠的二硫键信息，有助于揭示蛋白质的结构和功能特征。

中/英文项目报告

在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：

1.实验步骤（中英文）

2.相关的质谱参数（中英文）

3.二硫键定位分析详细信息

4.质谱图片

5.原始数据

二硫键定位分析一站式服务

您只需下单-寄送样品

百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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